Etablierung einer molekularbiologischen Methode zum direkten Nachweis von Affenpocken

Zusammenfassung

Endemisch kommen zoonotische Infektionen mit Affenpockenviren (mpox) in Menschen in West- und Zentralafrika vor, wobei Nagetiere als Vektoren vermutet werden. Es gibt 2 Variantengruppen, Klade I und Klade II (IIa und IIb). Im Jahr 2022 kam es zu einer atypischen Infektionswelle außerhalb des Endemiegebiets, wodurch der Bedarf an einer zuverlässigen molekulardiagnostischen Nachweismethode entstand. Am Institut für Pathologie Feldkirch, Österreich, wurden für die Etablierung des virellaMonkeypox real time PCR Kit (gerbion GmbH & Co. KG) 74 Humanproben untersucht. In 8/74 Proben konnte mittels Real-time PCR mpox (OPG185-Gen) nachgewiesen werden sowie durch eine anschließende Schmelzkurve von anderen Orthopoxviren und dem Pocken-Impfstamm (MVA) differenziert werden. Nach Abschluss eines mpox-Ringversuchs wurde die Methode aufgrund ihrer hohen Spezifität und Sensitivität in der Basisdiagnostik integriert, um eine zeitnahe Diagnose zu ermöglichen.

Schlüsselwörter: Real-time PCR, Schmelzkurvenanalyse, Affenpockenvirus, Zoonose

Abstract

Mpox is a zoonotic disease caused by monkeypox virus, with rodents as a probable vector. In humans it occurs endemically in west and central African countries, and has two distinct viral clades: clade I and clade II (IIa and IIb). With the atypical 2022 outbreak of mpox in non-endemic countries the need for a dependable diagnostic method arose. For the establishment of the virellaMonkeypox real time PCR Kit (gerbion GmbH & Co. KG) 74 human samples were analysed at the Institute of Pathology Feldkirch (Austria). In 8/74 samples mpox (OPG185 gene) could be detected via real time PCR and differentiated from other orthopox viruses or the smallpox vaccine (MVA) in the subsequent melt curve analysis. 65/74 samples tested negative for mpox, 1/74 exhibited an inhibition. After the completion of a round robin test the molecular diagnostic tool for mpox was integrated into lab routine, ensuring timely diagnosis.

Keywords: real time PCR, melt curve analysis, monkeypox virus, zoonotic disease

DOI: 10.53180/MTIMDIALOG.2023.0488

Entnommen aus MT im Dialog 7/2023